一、小龙虾“五月瘟”病原类型鉴定与PCR快速鉴定方法建立

2021年

1）5月份：病害流行期间进行田间调查和取样（100尾以上）；

2）6-12月份：实验室病原鉴定及感染实验。

2022年

1）1-6月份：感染实验，鉴定病原可靠性；

2）7-12月份： 如果鉴定得到可靠病原，建立病原PCR快速鉴定和定量方法，后续用于分子育种

二．小龙虾抗病标记鉴定与F1代群体选育

2021年

1）3-4月份

公司养殖塘放苗前，取同一群的苗种组织样品（200尾），保留于无水乙醇中。

2）5-6月份

(1)病害流行期间，对至少三个养殖塘进行调查取样；

(2)同一养殖塘中，收集最先显示“五月瘟”症状的濒临死亡的虾300尾以上，后期收集最后活下来且不显示“五月瘟”症状的虾300尾以上，保留于无水乙醇中；

(3)后期对其他无症状且生长快速活虾保种（500尾以上；定义为F1代选育群体）；

(4)对其他2个以上养殖塘也如上进行取样。

3）6-12月份

实验室遗传分析，鉴定抗病标记。如获得关联标记，将应用于2022年分子育种。

2022年

1）时间？：F1代（三个塘来源的1500尾）繁殖F2代；

2）3-4月份

F2苗种分三塘进行养殖；取F2苗种组织样品（200尾），保留于无水乙醇中。

3）5-6月份

(1)病害流行期间，对至少三个养殖塘进行调查取样；

(2)同一养殖塘中，收集最先显示“五月瘟”症状的濒临死亡的虾300尾以上，后期收集最后活下来且不显示“五月瘟”症状的虾300尾以上，保留于无水乙醇中；

(3)后期对其他无症状且生长快速活虾保种（500尾以上；定义为F2代选育群体）；

(4)对其他2个以上养殖塘也如上进行取样。

4）6-12月份

实验室遗传分析，鉴定抗病标记。如获得关联标记，将应用于2023年分子育种。

三．抗病品系群体或分子辅助选育

2021年

1)1-2月份

收集三个以上不同来源的快速生长群体，每个群体雌雄各50尾以上（定义为F0代）；

2)4-9月份

不同地理群体雌雄（选茶色和棕黑色卵巢个体）各30尾以上进行-配组；（如果条件允许，分多池塘进行繁殖）。

2022年

1)1-3月份

(1)苗种分6个池塘养殖（每个池塘>3000尾，其中三个池塘作为养殖对照，另外三个池塘作为病原实验塘）;

(2)取200尾苗种无水乙醇保存。

2)5-6月份

(1)对三个实验塘，通过自然或接种感染病原菌，进行抗病性状对比实验；

(2)对同一养殖塘中，收集最先显示“五月瘟”症状的濒临死亡的活虾300尾以上，收集最后活下来且不显示“五月瘟”症状的虾300尾以上，保留于无水乙醇中。

3)6-7月份

(1)商品虾阶段，对6个养殖塘中存活下来的虾，开展生长性状的测量（体长、体重等），并进行组织取样（每个塘300尾以上），用于实验室遗传分析；

(2)对最好的10%无症状且生长快速活虾个体（每个塘300尾以上）进行荧光标记，保种（300尾以上/养殖塘；定义为F2代选育群体）。

4)F2育种群体繁殖F3代。